گزارشات انجام آزمایشات میكروبیولوژی محیطی

برای نمونه برداری و جمع آوری از دستگاههای نمونه بردار خاصی آگلر استفاده می شود كه غالباً نوعی لوله نمونه برداری است كه طول و قطر مشخص دارد و جنس آن عموماً فلزی می باشد و ویژگی كه دارند روی سطح آنها مدرج شده است كه به منظور اندازه گیری از عمق مورد استفاده قرار می گیرد كه به شكل عمودی بر روی نقطه ای كه برای برداشت نمونه مشخص شده است قرار گرفته است و با فشار دادن دست یا فشارمكانیكی در خالك فرورفته تا عمق مورد نظر ازخاك پر می شوند و بعد محتویات آنها با یك ظرف ترجیحاً استریل یا یك كیسه پلاستیكی منتقل می شوند.

مرحله دوم نگهداری نمونه ها می باشد كه اگر مجبور به نگهداری شویم بایستی نمونه های جمع آوری شده در شرایطی كه از نظر دما و رطوبت تشابه زیادی با زمان برداشت نمونه دارند نگهداری شوند كه مثلاً در مورد نمونه های میكروبی دمای مشابه دمای برداشت نمونه مناسب بوده كه فعالیت میكرو لرگانسیم ها را كند می كند در مورد آزمایشهای شیمیایی روشهایی مانند منجمد كردن و خشك كردن برای نگهداری مورد نظر می باشد .

مرحله انجام آزمایش:

برای شروع كار ابتدا یك نقطه مناسب را برای برداشت نمونه در نظر می گیریم و در مرحله اول باید یك برچسب تهیه كرده و مشخصات دقیق محل برداشت نمونه را روی آن برچسب می نویسیم یعنی اینكه اگر برای برداشت مجدد نیاز باشد بایستی بتوانیم نمونه برداری را عیناً تكرار كنیم كه بتدریج فناوریهای جدید مثل    GPS نیز مورد استفاده قرار می گیرد در درجه دوم مشخصات ظاهری خاك  را بایستی یادداشت كنیم كه شامل: نوع دانه بندی خاك- پستی و یا بلندی - خشكی و دیگر مشخصات و بعد از مدتی كه مراجعه كردیم متوجه تغییرات آن شویم معمولاً این برچسبها حاوی تاریخ، شرایط اقلیمی، نام نمونه بردار و هر اطلاعات دیگری كه لازم بوده و به تفسیر نتایج آزمایش كمك كند می باشد.

انجام آزمایش:

پس از تحویل گرفتن وسایل مورد نیاز شامل یك كیسه نایلون تمیز و دماسنج و تیغه محل نمونه برداری پشت آزمایشگاه كنار درخت بزرگ زبان گنجشك و قسمت شمال غربی آن تعیین گردید و ضمن مراجعه در محل با استفاده از لوله مخصوص كه برای نمونه برداری پیش بینی شده بود با فشار مكانیكی در محل مورد نظر اقدام به نمونه برداری و تخلیه آن داخلا یك پلاستیكی گردید البته قبلاً با استفاده از دما سنج مخصوص و با فرو كردن آن در داخل و ایست چند دقیقه ای درجه حرارت خاك تعیین گردید سپس درجه حرارت هوا نیز اندازه گیری و بود. پس از ثبت مشخصات شامل 1- نام نمونه بردار: علی اكبر نوروزی 2- ساعت 15/15 روز دوشنبه 3/12/84 3- مكان: آموزشكده محیط زیست پشت آزمایشگاه میكرولوژی جنب درخت بزرگ زبان گنجشك و قسمت شمالی آن 4- درجه حرارت هوا  5- درجه حرارت خاك  6- شرایط اقلیمی : هوا مرطوب و پس از حدود ده ساعت بارندگی متناوب

در مرحله بعد از تحویل گرفتن یك عدد بوكال ( وسیله قراردادن خاك و لام ها و تماس آنها با همدیگر به منظور ایجاد تماس مناسب محیط كشت با خاك) و 6 عدد لام یا اسلاید كه با استفاده از میكروفیلم  آنها را به هم چسباند هو نفوذ ناپذیری آن را تضمین می كنیم كه یك طرف آنها را با سواپ كه قبلاً با استفاده از محیط كشت نوترینت براث (NB) آغشته می كنیم ( در شرایط استریل)

پس از آماده كردن سه عدد اسلاید دو طرفه كه یك طرف آن آغشته به محیط كشت NB   می باشد آنها را با فاصله در داخل بوكال قرار می دهیم و سپس با استفاده از قاشقك میان آنها را با آرامی با خاك پر می نماییم و درب بوكال را بسته و در دمای گرما گذاری می كنیم كه اگر شرایط دمای اطاق این باشد مطلوب است در غیر اینصورت آن را داخل انكوباتور به مدت دو هفته قرار می دهیم تا میكروارگانیم ها روی آن رشد كند.

عنوان آزمایش:

الف) شمارش باكتریهای هتروتروف هوازی خاك به روش Plate  count

هدف: آشنایی با روش كلاسیك شمارش باكتریهای زنده

تاریخ: 10/12/84

انجام آزمایش:

باكتریها غالبترین جمعیت میكروارگانیم های خاك را تشكیل می دهند و در خاكهای معمولی بین عدد در هر گرم خاك موجود می باشند در خاكهای فاضلاب و لجن فعال یا كشاورزی یا كود دهی بالا با میكروبی بالایی دارند.

استفاده از رفتهای متوالی و كشت در پلیت به روش pour plate می باشد خاك بدلیل اینكه دارای باكتریهای زیادی می باشد قابل كشت بصورت مستقیم نمی باشد لذا ابتدا سوسپانیون را تهیه و با استفاده از  مایع مناسب كه آسیبی به سلولها نرساند ماده جامد را وارد آن می كنیم و با استفاده از روشهای مكانیكی آن را به هم می زنیم یا با استفاده از دستگاهی بنام shaker  كه با دور مشخص ( مثلاً 2000RPM یادویست دور در دقیقه ) به مدت ده دقیقه كه سلولها به هم چسبیده جدا و معلق شوند البته این روش علاوه بر خاك  در مواد غذایی نیز مورد استفاده دارد . روش مناسب دقیق سازی تهیه وقتهای متوالی است كه مایع مناسب برای آن سرم فیزیولوژیك یا آب مقطر می باشد.